1 概要
  黄曲霉毒素是由曲霉菌属的黄曲霉和寄生曲霉等产生的次 级代谢产物，主要污染玉米、花生、坚果等。天然污染的黄曲霉毒素以AFB₁ 为主，AFB₁属于强烈致癌物质，肝脏是其主要的靶器官， 具有极强的急性毒性和致癌性。
  AFB₁检测方法主要有薄层色谱法（TLC）、高效液相色谱法 （HPLC）和ELISA方法，本试剂盒是以应用单克隆抗体为基础的ELISA检测方 法，可以准确快速检测粮谷类和花生及饲料中的AFB₁。

2 测定原理
  本试剂盒采用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA 法进行测定。用抗原包被微孔板，加入AFB₁标准品或样品、抗AFB₁单克隆 抗体进行孵育后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠 IgG抗体孵育，加入显色液，经过终止液终止后， 用酶标仪在450nm处测定OD值。

3 提供的物品
----微孔板…………………………………………………………… 包被有AFB₁-BSA
----5个浓度的AFB₁标准溶液（各0.5mL）
标准1：0ng/mL…………………………………………………………….直接使用
标准2：0.1ng/m…………………………………………………………….直接使用
标准3：0.2ng/mL ………………………………………………………….直接使用
标准4：0.5ng/m………………………………………………….…………直接使用
标准5：1.0ng/m………………………………………….…………………直接使用

----抗AF B1单克隆抗体溶液(6mL)……………………………………………直接使用
----酶标物(12mL)..………………………………………………………………直接使用
----显色液(12mL)..………………………………………………………………直接使用
----终止液(6mL)…………………………………………………………………直接使用
----浓缩洗液(30mL)..……………………………………………………………稀释使用

4 盒中未提供，需自备物品
----微孔板酶标仪（可于450nm处测定）、振荡器、粉碎机、微量移液器
----量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸
----氯化钠（分析纯）、甲醇（分析纯）、去离子水或蒸馏水

5 操作者注意事项
----标准溶液中含有黄曲霉毒素，应特别小心。
----使用过的玻璃容器及黄曲霉毒素溶液最好用pH7的次氯酸溶液 （10%v/v）浸泡过夜。
----终止液含有硫酸，避免接触皮肤。
----每次加样后立即将所有试剂放回2~8 ℃。
----每步加样时间应控制在5min内。
----孵育过程中应避光。
----不要使用过期试剂盒。
----不要交叉使用不同批号的试剂盒中的试剂。

6 储存条件
----保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻.
----显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
----将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2~8℃保存。

7 试剂变质的标志
----标准1的吸光度值小于0.5个单位（A_450nm<0.5）时， 表示试剂可能变质。

8 样品处理
----样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存。
----取5g粉碎的有代表性的样品， 加1.25g氯化钠及25mL70%甲醇-水溶液。
----强力振荡3分钟。
----用快速定性滤纸过滤。
----取1mL滤液，加水4mL进行稀释。
----取50μL稀释液进行分析。
----*根据需要可以增减样品量，但甲醇-水溶液的量也应相应增减。

9 酶免疫分析程序
----浓缩洗液为10倍浓缩液， 使用时与去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。
----取所需数量的板条插入微孔架，用洗液洗涤微孔板3min×2次。
----加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，记录样品及标准的位 置，每个标准和样品必须使用新的吸头。
----加入50mL抗体溶液到每个微孔（注意移液器管尖不要接触到孔 中的液体，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
----甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，最后一次应在吸 水纸上拍打以完全除去孔中液体。
----每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。
----用洗液洗涤微孔板3min×5次，最后一次应在吸水纸上拍打 以完全除去孔中液体。
----每孔加入显色液100mL（2滴），37℃孵育10~12min。
----每孔加入终止液50mL（1滴），立即用酶标仪在波长450nm 处测定吸光度值（OD值）。
注：在定量分析中，显色液和终止液需要用移液器准确量取。

10 样品浓度计算
  以标准溶液OD值与标准1OD值的比值为纵坐标，所对应 标准溶液浓度（ng/mL）的对数值为横坐标，制作标准曲线。根据样品 OD值与标准1OD的比值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为AFB₁浓 度的对数值，求得反对数即为测定液中AFB₁浓度C（ng/mL），按下列公 式计算出样品中AFB₁含量： AFB₁含量（mg/kg）= C×K
式中：C：稀释后样品提取液中AFB₁含量（ng/mL）
K：样品稀释倍数（按照本说明书中样品处理程序方法为25）

11试剂盒主要技术指标及参数
  测试盒最低检出浓度0.1ng/mL，回收率70%~120%，与 AFB₂的交叉反应系数小于1%，与AFG1的交叉反应系数为4.65%， 与AFG₁交叉反应系数小于1%。试剂盒校正曲线的线性范围 0.1~1.0ng/mL，试剂盒条内变异＜10%，条间变异＜15%。

附图 （仅供参考）